普林斯頓DNA測序Centri •Sep Columns
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產品型號：CS-900，32 Pack
產品代碼：
產品價格：
折 扣 率： 0
最后更新：2017-06-12
關 注 度：6523
生產企業：深圳市國泰宜豐科技有限公司
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產品詳細介紹 Centri •Sep Columns
使用CENTRI-SEP離心柱可以快速、有效地將大分子（蛋白質、核酸、碳水化合物復合物等）從小分子（核苷酸、緩沖液鹽分等）中純化出來。柱子基于 Sambrook 等。 描述而設計，即用凝膠過濾法將缺刻平移反應中的DNA純化。純化裝置是由一個特殊的多孔微型離心管、干膠、清洗管和樣品收集管組成，所有的設計都是以純化為目的。
該凝膠可以極好地回收大于16堿基對或25-mer的DNA片斷，并去除高于98%的鹽分、核苷酸混合物和其它 低分子量化合物。
使用試劑級水或合適的緩沖液水化離心柱，在微量離心管或吊桶式離心管中離心，去除液體。然后，將樣品加到凝膠柱上，再次離心，進行樣品處理。通過去除低分子量的化合物而使樣品純化，再使用選擇的緩沖液將純化的蛋白交換出來。
1、當用ABI 373A 和 377A進行DNA測序時的熒光素反應混合物的純化。
2、去除下列反應DNA/RNA中游離的標記dNTP’s：
z 缺刻平移
z 末端標記反應
z 聚合反應
3、在多種限制性消化反應中，脫鹽、去除痕量酚或交換緩沖液中的鹽分。
4、蛋白的純化與脫鹽。
對于一些通用技術如酚/氯仿抽提和乙醇沉淀等，這些離心柱的使用具有方便、快速、無毒等優良特性。
z 迅速有效的分離
z 不需預選擇緩沖液
z 室溫條件下，離心柱穩定
z 方便 20-100μl樣品的純化
離心注意事項：
z 使用水平式轉子或吊桶式轉子可以得到最高的產量。然而，固定角轉子微量離心也可以得到滿意的結果，并且省時。
z 對于可變速微量離心，不要使用按壓式按鈕，因為轉速會超過設定而使轉子以最大的離心力運行。
在這里：
rpm = 每分鐘轉
RCF= 相對離心力
r = 半徑，是從轉桿中心到轉子桶底部的距離
質量控制：對每一批CENTRI-SEP離心柱的分離效率都經過檢測，保證精確性。
材料供給：
z CENTRI-SEP離心柱包括干膠
z 清洗管（2ml）
z 樣品收集管（1.5ml）
推薦附加材料：
z 微量離心機（Eppendorf 5415C，可
變速或等速）
z 可調移液器（Pipetman 100 μl）
z 移液Tips(槍頭)
z 球狀移液管（Dispo, 2ml乳膠）
z 微量離心管架
z 振蕩器
常見問題：
1. 離心柱水化之后沒有將間隙液體除凈。
2. 在純化樣品過程中觸摸了離心柱。這兩種操作錯誤都會導致無效的分離。
解決方法：
1. 如果注意到某一離心柱在第一次離心后所釋放出來的液體比其他的少，則再短暫離心一次，通常可除凈多余的液體。
2. 將樣品直接點在凝膠床的中心，不要讓樣品接觸離心柱的壁。
（1）Reference: Sambrook, J., Fritsch. E.F., and Maniatis, T., Molecular Cloning: A Laboratory Manual. Cold
Spring Harbor Laboratory. 1989.
訂貨信息：
目錄號 規格
CS-900 32Pack
CS-901 100Pack
測序前的染料終止子的去除
由 Applied Biosystems 有限公司推薦的 CENTRI-SEP 離心柱可以將已完成的 DNA 測序反應中過量的DyeDeoxy™ 終止子高效、可靠地去除。下列方法可與 Taq DyeDeoxy™ 和 ABI Prism™終止循環測序試劑盒聯合使用，還可與 AmpliTaq®, FS等聯合使用，用 ABI 373A or 377A 測序儀讀取。
1. 水化離心柱
1.1 輕輕敲打柱子以保證干膠沉淀到離心柱底部。
1.2 打開離心柱頂端的蓋子，加入0.80 ml試劑級水或緩沖液使干膠吸脹。調整離心柱底部的塞子使其處于合適的位置以便離心柱可以自己站立。再蓋上蓋子，搖動、倒轉、或短時震蕩使干膠水化。干膠完全水化是非常重要的。
1.3 在使用之前，離心柱需要在室溫條件下水化至少30 分鐘。水化后的離心柱于 4°C可以冷藏幾天。補充10 mM 疊氮化鈉可以儲存更長時間。在繼續使用之前，需將離心柱恢復到室溫。
2. 去除縫隙液體
2.1 倒轉或短促敲打離心柱，使凝膠乳漿化，并盡量
使其保持水平狀，清除離心柱凝膠中的氣泡，然后將離心柱放在微量試管架上使膠沉淀。
2.2 當凝膠已經沉淀無氣泡后，打開離心柱的頂蓋，去掉底部的塞子。
2.3 將離心柱中過量的液體在清洗管（2ml）中控干。如果液體沒有通過離心柱的末端立刻流出來，則使用一只2ml的乳膠頭吸管，在柱子的頂端給予一定的空氣壓力，迫使液體開始流過離心柱過濾器。在液體流完之后，離心柱將自動停止。大約200-250μl的液體從離心柱中流出，棄掉液體。
2.4 在可變速離心機上以750g 將離心柱和清洗管一起離心2分鐘，以便去除縫隙中的液體。例如：使用Eppendorf 5415C型微量離心管，在750g（7.3cm轉子）的離心速度為3,000rpm。如果使用固定角微量離心機， 一定要在離心柱中使用定位標記模，以便追蹤離心柱的位置。
2.5 除去大約300μl液體，如果離心柱末端還有一小滴液體，用紙吸掉。棄去清洗管和間隙液體。不要使凝膠過分干燥。即刻進行樣品處理。
3. 樣品處理
3.1 將離心柱置于明亮處，在凝膠頂端加入20μl 已完成DyeDeoxy™終止子反應的混合物，仔細地將樣品直接地加入到凝膠床頂端的中心位置，不要攪動凝膠的表面（見圖1）。不要用反應混合物或樣品吸管的頭觸及離心柱的側壁，因為這會降低純化的效率，以及由于過量的染料使實驗失敗。
3.2 將離心柱放入樣品收集管（1.5ml）后，置于轉子中，保持固有的離心柱方向。柱子中凝膠介質的最高點應該總是朝向轉子的外側（見圖1）。在750 ⋅ g離心柱子和收集管 2 分鐘。純化的樣品將被收集在樣品收集管的底部。棄去離心柱，使用ABI樣品制備方法繼續處理樣品。
3.3 真空離心干燥樣品，不要使用加熱法。
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| 會員級別：免費會員 |
| 加入時間：2017-01-11
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