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蛋白質(zhì)純化試劑盒--Pro·SpinTM

產(chǎn)品型號：CS-800，50 Pack
產(chǎn)品代碼：
產(chǎn)品價格：
折扣率： 0
最后更新：2017-06-12
關(guān) 注度：5531
生產(chǎn)企業(yè)：深圳市國泰宜豐科技有限公司

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產(chǎn)品詳細介紹
蛋白質(zhì)純化試劑盒--Pro·SpinTM

Pro·SpinTM 離心柱的設(shè)計以去除標記抗體中游離的熒光染料、半抗原和載色體等為目的，有利于緩沖交換和脫鹽。（請參照“綜合啟示”一節(jié)中有關(guān)其它類型蛋白純化的補充說明）純化單元由

（1）一個特殊的含有凝膠過濾介質(zhì)的多空微量離心管，
（2）清洗管，
（3）樣品收集管組成。
   使用緩沖液水化離心柱介質(zhì)（參照第二步有關(guān)水化緩沖液注解）。在微量離心機中離心去除多余的液體。將抗體樣品上樣在離心柱上，再次離心，回收純化的標記抗體。
   Pro· SpinTM 離心柱具有下列優(yōu)良特性：

     1 多樣去除染料、半抗原或鹽
     2 高效標記抗體的回收率大于90%
     3 簡單僅需要一個臺式離心機
     4 快速僅兩次2分鐘的離心步驟
     5 可靠一致的結(jié)果
     6 方便室溫儲存穩(wěn)定長久的保質(zhì)期

   1 mg 標記抗體純化方法
    1. 每一個離心柱可容納樣品近100uL，如果樣品體積大于100 uL，則將樣品分成份，每份使用不同的離心柱進行純化。
    2. 輕輕敲擊離心柱以確保干膠沉到離心管底部，打開離心管頂蓋，加入650 uL水化緩沖液。水化緩沖液
       注意事項：
       用PBS緩沖液水化離心柱。除了PBS之外，其它緩沖液也可使用，但有可能使非特異性抗體通過離子的或疏水性相互作用與離心柱結(jié)合。這些相互作用會影響標記抗體從離心柱中的回收。
    3. 蓋上頂蓋，劇烈震蕩5秒鐘，短促敲擊離心管底部去除氣泡。離心柱使用之前，至少水化30分鐘。
     離心柱水化注意事項：使所有干膠都水化是非常重要的。.
    4. 水化30分鐘之后，打開離心柱頂蓋，拿掉離心柱底部的塞子。
       離心柱儲存注意事項：
       水化的離心柱可以在4°C儲存幾天。補充10 mM疊氮化納可以儲存更長時間。使用之前將離心柱恢復(fù)到室溫。
    5. 使用可變速離心機，在750 x g下，將離心柱同清洗管一起離心2分鐘，以便去除多余的液體。
       固定角微量離心注意事項：
       如果使用固定角微量離心，將定位標記模子放入到離心柱中，以便保持追蹤離心柱的位置。準確離心速度的計算
使用水平式轉(zhuǎn)子或吊桶式轉(zhuǎn)子可以得到最高的產(chǎn)量。然而，固定角轉(zhuǎn)子微量離心也可以得到滿意的結(jié)果，并且省時。對于可變速微量離心，不要使用按壓式按鈕，因為轉(zhuǎn)速會超過設(shè)定而使轉(zhuǎn)子以最大的離心力運行。如果不能確定在設(shè)置的離心速度上所產(chǎn)生的重力，則使用下面的公式計算出正確的速度：

在這里：
rpm = 每分鐘轉(zhuǎn)
RCF= 相對離心力
r = 半徑，是從轉(zhuǎn)桿中心到轉(zhuǎn)子桶底部的距離

    6. 用紙吸掉離心柱末端小滴液體，棄去清洗管和多余液體。不要使凝膠過分干燥。即刻進行樣品處理。結(jié)合抗
       體的純化
    7. 將離心柱拿到明亮處，取出約100 uL樣品（參見步驟1），加到每個離心柱的頂端。
       離心柱上樣注意事：
       仔細地將樣品直接地加入到凝膠床頂端的中心位置，不要攪動凝膠的表面。不要用反應(yīng)混合物或樣
       品吸管的頭觸及離心柱的側(cè)壁，因為這會降低純化的效率。
    8. 將各個離心柱放到收集管中，再將二者放到轉(zhuǎn)子中，保持固定的離心柱方向。
       離心柱定位注意事項
       離心柱中凝膠介質(zhì)的最高點應(yīng)該總是朝向轉(zhuǎn)子的外側(cè)。
    9. 750 x g，離心2分鐘，純化的抗體結(jié)合物將被收集到收集管的底部。
    10. 棄去離心柱
    11. 在合適的條件下儲存純化的抗體

   標記抗體的回收
     通過表面熒光圖象和考馬斯亮蘭染色的SDS變性凝膠電泳的檢測得知，使用PBS水化緩沖液水化離心柱，可以回收90%多的熒光素標記抗體。

材料供給 50個Pro•Spin 離心柱；50 只清洗管；50 只樣品收集管

推薦附加材料
微量離心機；移液器（槍）；槍頭；微量離心管架；震蕩器
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為了全面地了解有關(guān)Fluoro•SpinTM熒光蛋白標記和純化試劑盒，包括我們公司新的近紅外線染料的信息，
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標記蛋白純化綜合啟示
除了抗體之外，使用 Pro•Spin 離心柱也可以從蛋白中去除染料、半抗原、載色體和鹽。然而，由于蛋白與離心柱基質(zhì)特異性或非特異性的相互作用，使蛋白的回收率降低。下表中列出了常見的相互作用模式，并給出了解決的方法。

問題                                                      解決方法
與離心柱基質(zhì)的疏水性相互作用加入非離子型變性劑，減少離子強度或增加水化緩沖液pH
與離心柱基質(zhì)的離子型相互作用增加水化緩沖液的離子強度
樣品沉淀                                          增加離子強度，去除水化緩沖液中的鹽或稀釋樣品
樣品的蛋白酶降解                          在水化緩沖液中加入合適的蛋白酶抑制劑

問題                                                 解決方法
與離心柱基質(zhì)的疏水性相互作用加入非離子型變性劑，減少離子強度或增加水化緩沖液pH
與離心柱基質(zhì)的離子型相互作用增加水化緩沖液的離子強度
樣品沉淀                                          增加離子強度，去除水化緩沖液中的鹽或稀釋樣品
樣品的蛋白酶降解                          在水化緩沖液中加入合適的蛋白酶抑制劑

Pro·Spin 和 Fluoro·Spin 是Princeton Separations 有限公司的產(chǎn)品商標。NIRD (Near Infrared Dye近紅外線染料) 是EMP Biotech GmbH公司的產(chǎn)品商標。 NIRDS 由Dyomics 生產(chǎn)。
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